В цьому експерименті показано, репрезентативну групу мишей, отриманих в ході цих хірургічних процедур. П'ять мишам імплантували GFP-позитивних PC3-M клітини, що містять вектор управління. Пухлини давали рости протягом шести тижнів, а потім кілька параметрів були оцінені. У фіг.1 і 1В, то показують зміна маси тіла і споживання їжі у мишей, відповідно. Існує невеликий провал в маси тіла і споживання їжі навколо дати операція у зв'язку з анестезією. В ході експерименту, вага тіла повільно збільшується після операції, а потім починає знижуватися до кінця експерименту пухлина як навантаження досягає критичного рівня. Це буде супроводжуватися споживання їжі у цих мишей.
У Фиг.2 і 2В, представництва розміри пухлин представлені отримані. Індивідуальні розміри пухлини варіюватися, але в середньому ми досягаємо пухлини приблизно 1 грам, снормальний дисперсія між 0,5-1,5 г, а розмір пухлини 1 см 2, з нормальної дисперсії 0,5-1,5 см 2. Хоча розмір пухлин змінюється, вони не корелюють з кількістю отриманого метастаз, показаного як в даній роботі, і наші раніше опублікованих робіт 10. Проте, від цієї моделі, можна визначити вплив лікарської терапії або молекулярних змін на вагу і розмір пухлини. Важливим моментом в цій моделі, коли відповідне кінцевої точки для експерименту. На малюнках 2В і 2Г, ми покажемо зміни у вазі і розміру пухлини пухлини в одній конкретній лінії PC3-М клітин стабільно трансфіковані GFP і вектора керування на 4 тижні і через 6 тижнів. Протягом останніх двох тижнів, середня вага пухлини збільшився в 2,7 рази, а розмір пухлини в 1,9 рази. Це показує, що додавання 1-2 додаткових тижнів експерименту може значно впливати на результати. Як безліч факторів може змінити ріст пухлин, у тому чіслевозраст і розмір мишей, кількість проходів клітин і т.д. ми не рекомендуємо її припинення експериментів поки видимих пухлин не спостерігається в більшості мишей.
На Фіг.3-3C, кількість метастазів кількісно трьома різними способами. На Фіг.3, загальна кількість GFP-позитивних клітин людини РПЖ представлені. У фігурі 3В, число клітин локусів, або місцях, де метастатических депозити присутні, показано. Нарешті, на фіг.3С, число різних метастазів, як визначено чітко пов'язаного групи клітин, що показує 5 або більше GFP-позитивних клітин людини СПС, відображається. Репрезентативні фотографії цих різних умовах показані на фіг.4-4D. У малюнку 4A, окрема клітина в 40-кратному величиною підсвічується зі стрілкою. Зверніть увагу на коричневе забарвлення і великі окремі ядра. Поруч розділ легких фарбували H & E окрашіваніепоказано на фіг.4В, підтверджуючи, що без GFP, виявлення ракових клітин як і раніше легко досяжно. Це фото береться в 40-кратному величиною і клітина підсвічується зі стрілкою. У фіг.4С, кілька локусів різної кількості клітин в 10-кратним розміром відображаються і кожен локус виділені стрілкою. . Нарешті, на малюнку 4D, метастатичним депозит 10 клітин показано. Як впливати на ці методи дані показали відмінностей в миша 1 і 3 миші. Миша 1 має меншу кількість загального числа клітин в легенях, в середньому 21,5 клітин на секції легких, у порівнянні з Mouse 3, який має в середньому 700 клітин на секції легких. Проте, миша 3 має менше локусів, або в місцях, де клітини присутні, ніж миші 1. Миша 3 має відносно невелике число сайтів метастазів, але кількість клітин на одиницю площі дуже висока в 82 клітин на локусів через декілька дуже велике кількість клітин метастазів. На противагу цьому, миша 1 має більше унікальну локуси, але значно еEwer клітин на місці в тільки в середньому два клітин на місці. Ці різні параметри можуть пролити світло на кінетики клітин оборотом в легені і їх здатності починають рости і розмножуватися.
Крім того, на малюнку 3D, ми покажемо зміни в загальних метастатических клітин на легких у мишей розкривали в чотири порівняно з шести тижнів. Як описано в цифрах 2В і 2Г, значні зміни спостерігаються у вазі і розмірі пухлини в останніх двох тижнів експерименту. Це відтворюються на малюнку 3D. Миші розкривали через чотири тижні не показали метастатичного розвитку, в той час як миші, в 6 тижнів показали метастатических клітин у всіх мишей оцінювали. Це ще раз демонструє важливість забезпечення мишей Розтин виконуються на пізній стадії кінцевій точці для забезпечення формування метастазів сталося.
Додатковим вимірювання в цій моделі є молекулярні зміни, що відбуваються всередині первинна пухлина. На фіг.5-5C показано, три Приклад Qrt / PCR експериментів вимірювання три гена, що представляють інтерес в метастатической прогресії, матриксной металлопротеінази 2 типу (ММП-2), матриксной металлопротеінази 9 Тип (MMP-9), а білок теплового шоку 27 ( HSP27) відповідно. Будь інтерес ген вимірюється за допомогою Qrt / ПЛР можуть бути виявлені за допомогою цієї техніки. Крім того, рівні білка може бути визначена кількісно з використанням вестерн-блот процедури.
Малюнок 1. Спостерігається вага тіла і споживання їжі у тварин. AB) Маса тіла в грамах або середнє споживання їжі на миша в день в грамах, записується протягом усього експерименту і показано в позиції А) і В) відповідно.
fig2highres.jpg "Спочатку" / files / ftp_upload / 50873 / 50873fig2.jpg "/>
Малюнок 2. Розмір пухлини і вага пухлини в приватних осіб і груп мишей. AB) Пухлина вага в грамах і розміру пухлини в сантиметрах квадратів з п'яти репрезентативних контрольних мишей, а середній з п'яти мишей в кінці шести тижнів показані в а) і б) відповідно. CD) Порівняння ваги пухлини в грамах і розмір пухлини в сантиметрах квадратів між групами мишей розкривали в чотири і шість тижнів. Натисніть тут, щоб збільшити малюнок .
Малюнок 3. Метастазування в приватних осіб і групи мишей. AC) Середня метастатичним spreaд в розділі легких протягом п'яти окремих мишей і в середньому з п'яти мишей в кінці шести тижнів, представлених або як загального числа клітин (A), розташування метастатичних клітин (B), або окремої метастазів, як це визначено 5 + клітин в чітко визначені кластера (С). D) Порівняння середнього числа метастатичних клітин в групі легких на миша між мишей розкривали в чотири і шість тижнів. Натисніть тут, щоб збільшити малюнок .
Малюнок 4. Представник зображення легеневих метастазів. А) Індивідуальний GFP позитивні легкого при 40-кратному цілі буде виділено з лука. B) поруч легкіхраздел з А), показано в одній камері під H & E фарбування. С) Одна частина легких в 10 разів Мета з сім окремих локусів, що містить різні кількості клітин. D) один окремий метастазування при 10x мети, що містить 10 ракові клітини чітко визначених як одна група.
Малюнок 5. PCR аналіз трьох метастатических цікавлять генів. Qrt / ПЛР проводили в окремих зразках пухлин, отриманих від мишей у віці шести тижнів. Відносні рівні мРНК Стенограма ММР-2 (А), ММП-9 (У), і HSP27 (С) вимірюються, нормована на GAPDH. Натисніть тут, щоб збільшити малюнок .
