Малюнок 1A показує RWV з маслом всередині судна. Крапля 150 мкл середу, що містить один шматок тканини яєчників або три альгінату намистини з інкапсульованим фолікулів була введена в масло. Середній крапелька зберігалася в стан терміналу швидкості через рідини опору на крапельки всередині обертового нафти в розмірі 25 обертань в хвилину, яка створюється умова імітованої мікрогравітації (g s мкг). В експерименті управління, тканин яєчника або капсулированной фолікули були культивували в краплі 150 мкл середовища, покриті мінерального масла в 35 × 10 мм страви (рис. 1B), які викликали 1 - g умова.
Для вивчення впливу штучної мікрогравітації на preantral фолікула розвитку в пробірці, ми культивували тканин яєчника 14 день стара миша під 1 - g (управління експеримент) або s мкг умов. Ми підрахували кількість здорових фолікулів в H & E, забарвлених секцій в двох умов після 0, 2 і 4 днів культури (рис. 2). Ми виявили, що виживання фолікула в тканин яєчника лікування в стані g s мкг був значно нижче, ніж при 1 - g стан на 2 день і день 4 культивування (p <0,05, ANOVA). Крім того ми виявили, що ні PCNA позитивні сигнали були виявлені в тканин яєчника в умовах g s-μ (рис. 3). У культурі ізольованих preantral фолікулів, інкапсульовані в альгінатние намиста, ми показали, що значно більше фолікулів вижили до 1 - g стан (76,8% ± 5,3%, n = 227) за умов g s-μ (54,4% ± 6,7%, n = 249) на 4 день культивування. Крім того, розмір ооцитів мав ніякого істотного збільшення після 4 днів культивування, хоча фолікула розмір значно зросли в обох умовах гравітації (рис. 4). Однак, фолікули з менш ніж 10% мертвих гранулези клітин (рис. 5) були значно нижче, під 1 - g умова (81,5 ± 5%, n = 10) ніж за умови g s-μ (90 ± 8%, n = 10) (p <0,05).
Для вивчення впливу штучної мікрогравітації на функціональність ооцитів, ми вивчили вираження яйцеклітини специфічних маркерів GDF-9. Ми продемонстрували, що вираз GDF-9 був напрочуд вниз регулюється в тканини яєчників за умови g s-μ (рис. 6). Крім того ми продемонстрували часті ультраструктурних аномалії ооцитів органел в Інкапсульована фолікулів на 4 день культури в умовах g s-μ (рис. 7).
Малюнок 1. Монтаж s- μ g і 1 g культура умов. (A) s-μ г був створений обертових стіні судна і зберігання предметів культури в стані постійного падіння в межах переміщення нафти. (B) був створений 1 - g умови культивування тканин яєчника або фолікулів на поверхні чашку Петрі, покриті з мінеральним маслом. Стрілка вказує краплі середнього. Шкали бар = 1 см. Цей показник був змінений з Чжан і ін. 17 будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.
Малюнок 2: Ефекти s мкг на яєчників культури тканини. (A) розділи тканин яєчника культивували під 1 - g або s-μ g умови для 0, 2 і 4 днів. Шкали бар = 50 μm. (B) фолікул щільність в розділах тканин яєчника. Помилка бар являє 1 SEM, *: p <0,05. Цей показник був змінений з Чжан і ін. 17 будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.
Малюнок 3: Імуногістохімія PCNA. Вираз протеїну PCNA був розглянутий в клітинах гранульози в тканин яєчника культивували під 1 - g або s-μ g умови для 0, 2 і 4 днів. Шкали бар = 50 мкм. Цей показник був змінений з Чжан і ін. 17 будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.
Малюнок 4: Ефекти s-μ g на культуру інкапсульоване preantral фолікулів в альгінатние намистини. (A) морфологія preantral фолікулів культивували під 1 - g або s-μ g умови для 0 днів і 4 дні. Шкали бар = 50 μm. (B) ооцитів і (C) фолікул діаметром були зіставлені між 1 g і s-μ g умов. Помилка бар являє 1 SEM, *: p <0,05. Цей показник був змінений з Чжан і ін. 17 будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.
Малюнок 5: Assay життєздатності клітини. Представник зображення були взяті під мікроскопом при 400-кратному. Пробірного використовує флуорексон AM для візуалізації живих клітин забарвлених в зелених і EthD-1 для візуалізації ядер мертвих клітин червоною барвою. (A): фолікул з ~ 100% живий гранулези осередки (зелений). (B): фолікул з живою гранулези осередки (зелений), а також більш ніж 10% мертвих клітин (червоний). Шкали бар = 50 мкм.Етот показник був змінений з Чжан і ін. 17 будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.
Малюнок 6: Імуногістохімія GDF-9. Вираз протеїну GDF-9 був розглянутий в яйцеклітин в тканин яєчника культивували під 1 - g або s-μ g умови для 0, 2 і 4 днів. Шкали бар = 50 мкм. Цей показник був змінений з Чжан і ін. 17 будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.
Малюнок 7: Культивовані ультраструктурних аналіз ізольованих preantral фолікулів під 1 - g або s-μ g умови на 4 день культури. (A) яйцеклітини з микроворсинки (стрілки) в zona pellucida (1 - g умова). (BF) Ооцити з великими вакуолей (*), multilamellar органів (#), ліпідного крапель (стрілки), vacuolated мітохондрій вистачає макули (стрілка) і диспергування Гольджі (стрілка), відповідно (s-μ g стан). O: ооцитів; ZP: zona pellucida. Цей показник був змінений з Чжан і ін. 17 будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.
