Метод, описаний тут використовується двостороння освітлення пучка, в поєднанні з оптичним вирівнюванням зразків тканини серця миші для досягнення глибокого зображень глибину і обсяг зображень з достатньою роздільною (рис. 1). Для калібрування системи, флуоресцентний намистини були розміщені всередині скляних трубок і системи обробки зображень. Намистини були потім образ візуалізується в площині xy площині yz, і в площині xz, щоб отримати точку поширення функція (PSF) для сістеми8. Калібрування системи була прийнята резолюція в бічній напрямку dбокових ≈ 2.8 мкм і резолюцію в осьовому напрямках dXZ ≈ 17.4 мкм і dYZ ≈ 17.9 мкм при використанні гліцерину в якості вкладення средніе8.
Після того, як люмінесцентні намистини були використані для калібрування, система електронного фотографування використовувався для зображення серця миші на 1 день і 7 днів після пологів (рис. 2) 8. Розміри шлуночків порожнини, клапанів серця і шлуночкової trabeculation очевидні в ці зображення серця миші. Для вивчення cardiomyocyte диференціації в серце, гетерозиготних мишей knockin з КРР мічених кардіоміоцитів були образи післяпологовий. Зображення Cre мічених кардіоміоцитів знаходяться в кожному напрямку площини поряд з 3-D візуалізації в сердце8 (рис. 3).
Крім вивчення післяпологовий мишей, тепловизионная система також використовується для вивчення серце дорослого миші. Спочатку генної терапії був використаний для впровадження GFP-міткою ROMK канали в серце миші. На 7,5 місяців образи серце миші і ці ROMK канали були детально висвітлені в стінці шлуночка (рис. 4). Цей крок в процедурі показана здатність цієї системи зображення великих вибірок і розрізняти структури, не бачив з гістологічним плямувати в серце. Малюнок 4 показує ROMK канали з кожної площині напрямку разом з 3-D візуалізації сердца8.
Малюнок 1: Принципова схема системи мікроскопії флуоресцірованія світло лист. Це 3-мірної візуалізації системи мікроскопії флуоресцірованія світла лист, включаючи відстані між компонентами і фокусні компонентів, що використовуються в системі. Ця цифра була змінена від Yichen Дін і ін. 8. будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.
Малюнок 2: Вид світла лист мікроскопії системи виявлення зверху. Це вид зверху мікроскопії системи освітлення, двостороння, де потемніла синій регіон представляє променя в кожному місці служби в рамках системи. Включено 2-мірної розширений розділ, який показує один з регіонів, що складається з ахроматические дуплетом і освітлення мети. Цей розширений розділ також показує принцип формування світла листа і як промені об'єднуються для форми, двостороння освітлення. Ця цифра була змінена від Yichen Дін і ін. 8. будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.
Малюнок 3: 3-D зображення післяпологовий мишачих серця. () Ця група показує зображення серця післяпологовий миші на день 7 показані порожнину шлуночка. (B) Ця група показує зображення серця післяпологовий миші на день 7 показані товщина стінок шлуночка. (C) Ця група показує зображення серця післяпологовий миші на день 1 показано розташування структур клапана. (D) це зображення показує розширений розділ з серця післяпологовий миші на день 1 показані з м'язів, розташований в атріумі серця. (E) це зображення показує trabeculation в шлуночку в серці післяпологовий миші на 1 день. Лінійки: 1 мм. Червоний кружляв область в межах врізні показує два серця напівпрозорі миші після проходження чіткості техніку і вставляються в трубки боросилікатне скло. Ця цифра була змінена від Yichen Дін і ін. 8. будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.
Малюнок 4: Зображення Cre мічених кардіоміоцитів в післяпологовий миші серце з кожної площині. Серце миші P1 був відтворений образ з КРР мічених кардіоміоцитів в кожній площині перетину: () XY, (b) YZ і (c) XZ. Ці поперечні зображення показують наявність Cre мічених кардіоміоцитів в передсердя і шлуночка P1 миші. (D) зображення також були об'єднані для створення 3-D візуалізації серця. Червоний кружляв область в межах врізні показує два серця напівпрозорі миші після проходження чіткості техніку і вставляються в трубки боросилікатне скло. Лінійки: 1 мм. Ця цифра була змінена від Yichen Дін і ін. 8. будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.
Малюнок 5: Зображення показані канали ROMK з кожної площині серця дорослого миші. Серце миші було imaged на 7,5 місяців, щоб показати наявність і розташування ROMK каналів. Серце було imaged в кожній площині перетину: () XY, (b) YZ і (c) XZ. Значення шкали сірого кольору показує оптичний інтенсивності в межах зображення, з світліше регіонів, відповідних більш інтенсивності світла і темні, відповідний менше інтенсивності світла. (D) зображення також були об'єднані для створення 3-D візуалізації серця, і оригінальні образи сірий були псевдо-кольоровий, так що ROMK канали з'являються зелені. Червоний кружляв область в межах врізні показує напівпрозорі дорослих миші серця після проходження чіткості техніку і вставляються в трубки боросилікатне скло. Лінійки: 1 мм. Ця цифра була змінена від Yichen Дін і ін. 8. будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.
Додаткові малюнок 1: зображення камери ABS з трубки боросиликатное світла аркуші система електронного фотографування. Будь ласка, натисніть тут, щоб завантажити цей файл.
