Інтубації за допомогою даної методики є надійним і швидким. Відповідний розміщення ендотрахеальної трубки найбільш легко перевірити, спостерігаючи видихуваного газу бульбашок із затопленої видиху контуру вентилятора (як правило, в PEEP пастку) і негативних відхилень на тиск в дихальних шляхах трасування (рис. 1). Негативні відхилення по відстеженню тиск в дихальних шляхах є найнадійнішими. Інші використовували рух невеликий краплі рідини в внутрішньовенної трубки, підключеної до видиху вентилятора контуру 2. Хоча ми не використали цю техніку широко, вона повинна бути досить перевірити розташування трубки. Досвідчений оператор може інтубувати мишей за допомогою цього методу близько 90% часу при першому проході. Для тих, які зазнають невдачі, трубка негайно видалені, тварина reinduced з ізофлуран анестезії, а також розміщення знову намагалися. Якщо тварина залишили з'єднаний зі схемою вентилятора в разі ESOфагеальний інтубація, шлунок поступово вдувати генерації високих тисків пік дихальних шляхів, гіпоксемії, і в кінцевому рахунку до смерті, якщо немає втручання. Якщо тиск високий піковий дихальних шляхів спостерігаються без негативних зусиль вдиху, тварина повинна бути негайно вилучені з вентилятора і екстубіровать. Проте видалення тварина від вентилятора і видалення ендотрахеальної трубки легко змінити це. За останні 300 досліджень на тваринах, які потребують інтубації досвідчений оператор интубацию 80% з першої спроби і більш ніж 95% по другої спроби. Всі тварини були інтубувати третьої спроби досвідчених операторів. Час, необхідний для інтубації мишей до 5 хв для наркозу, 90-120 сек індукувати миша ізофлураном і 30 сек для виявлення і фактично інтубувати дихальні шляхи. Ми виявили, що нові слухачі повинні навчитися візуалізувати голосові зв'язки в першу чергу. Якщо вони можуть успішно продемонструвати повне уявлення про голосових зв'язок десять разів, вони готові почати навчання інтубувати. Після того, як слухачі успішно інтубувати 10 раз, про що свідчить негативних відхилень на тиск в дихальних шляхах трасування в самостійним диханням тваринного, вони готові виконати дослідження на експериментальних тварин. Проте, навчальне відео значно прискорить процес навчання. Тільки недосвідчені оператори викликати травму дихальних шляхів за допомогою цієї техніки і загибель тварин може відбуватися в цій обстановці, навчання техніці. Проте, втрата тварин з досвідченим оператором рідко. Це наш досвід в більш ніж 1000 тварин протягом останніх 4 років.
20 G катетер використовується в якості ендотрахеальної трубки у мишей, оскільки вона робить герметичне ущільнення з дихальних шляхів, тим самим дозволяючи точні дані про тиск у дихальних шляхах, і це достатній діаметр для заходів опір дихальних шляхів. Проте, за допомогою трубки PE як стилет чи Бужи дозволяє 20 G легко і надійніше пройти через голосові зв'язки. 1 в (2,5 см) довжина катетера дозволяє трубка бути розміщені з маточиною на нижніх різців для стабільності, але не викликаючи травму нижніх дихальних шляхів або інтубірованіе mainstem бронхи.
Ми використовуємо цю техніку, щоб зробити вимірювання опору дихальних шляхів, виконати криві доза-реакція метахоліну (рис. 2), і виміряти тиск-об'єм відносини в легенях (рис. 3). Для всіх цих вимірів тварини повинні бути повністю паралізована, щоб отримати придатні до вживання, точні дані. Для цієї мети ми використовували панкуронію бромід як недорогий, недеполяризуючих розслабленому в nonrecovery експериментів. Однак, панкуронію більше не доступні і не можуть бути використані на тварин, які збираються відновити через його тривалим періодом напіврозпаду. Таким чином, ми перейшли на векуронію (30 хв) або рокуронію для паралічу через їх коротким періодом напіввиведення, забезпечуючи можливість повторних вимірів з плином часу. Інші дослідники іспользовалісукцінілхолін як деполяризующего розслабленому, але його період напіврозпаду був занадто коротким для більшості наших експериментах. Також сукцинілхолін може викликати вивільнення гістаміну 3 і, отже, було б потенційні втручаються змінної.
Ми також використовували прямий метод Ларингоскопія широко на поставку досліджуваних речовин в легені, заснованої на техніці спочатку повідомлялося в щурів Hastings 4. Більшість досліджень використовували носової інстиляцію на поставку досліджуваних речовин до нижніх дихальних шляхів, тому що миші є облігатними носові дихальні вправи і закладеність закапування легко . Проте, ми знайшли метод носа закапування ненадійними для кількісного доставки. При використанні методики прямої ларингоскопії ми виявили, що кількісний доставка є більш надійним і розподіл в легких більш рівномірним. Наша головна використання прямого методу закапування в тому, щоб доставити антиген до I нижніх дихальних путейNA модель алергічного запалення (рис. 4) і гіперчутливість дихальних шляхів (рис. 2). Ми також доставлені інші випробовувані речовини, такі як цитокіни і лікарських засобів за допомогою цього методу.
Трасування тиску Малюнок 1. Дихальних. Синя лінія відображає тиск в дихальних шляхах і червона лінія відображає дихальний обсяг трасування в миші відразу після інтубації. Негативні (зверху вниз) відхилення кривої тиску (чорні стрілки) вказують на покоління негативного внутригрудного тиску у мишей (C57BL / 6, 24 г) по спонтанної дихального зусилля і вказує правильне розміщення ендотрахеальної трубки. Натисніть тут, щоб V МЕН велику версію цієї фігури.
Малюнок 2. Опір дихальних шляхів і криві доза-відповідь метахоліну. Миші (C57BL / 6) интубацию за цією методикою можуть зазнавати заходи опір дихальних шляхів і бронхіальної реактивності за допомогою подвоєння дози метахоліну доставляється через ультразвуковий розпилювач. У цьому представницькому Наприклад, елемент управління тварина має мінімальний відповідь на метахоліном до 25 мг / мл і овальбуміновой імунізовані і інфіковані миша демонструє гіперчутливість до метахоліну. Ці виміри проводяться з мишами інтубірованних з 20 G катетера і не відрізняються від тих, що зроблені в tracheostomized миші.
/ Files / ftp_upload / 50269 / 50269fig3highres.jpg "Спочатку" / files / ftp_upload / 50269 / 50269fig3.jpg "/>
Малюнок 3. Тиск-обсяг крива. Це представник крива тиску обсяг в 20 г миші, яка була інтубірованних з 20 G внутрішньовенний катетер, паралізована з панкуронію, і штучної вентиляції легенів. Це показує, що катетер не тече до 30 см H 2 O тиску і, отже, може бути використаний, щоб зробити точні вимірювання тиску гучності відносини в миші.
Малюнок 4. Овальбумін модель алергічного запалення. Це представник гематоксиліном і еозином пофарбовані секцію миші легких, який був імунізованих і заражених Овальбумін. Він демонструє узагальнений ефект закапування ovalbuмін вводять з використанням прямої ларингоскопії (збільшення 4X).
