Застосування методу ІФА в птахівництві
Ціни на ВАКЦИНИ дивіться на сайті СЕЛЬХОЗТОРГІ.РФ
А.А. Черніков, технічний консультант компанії «БіоЧек» в країнах СНД,
А.В. Клінков, ТОВ « Сімба »
Спостерігаючи за еволюцією поширення хвороб птиці в світі, стає зрозумілим, що прийшов час концентрувати свої зусилля на запобіганні захворювань, а не на їх лікуванні. До такого висновку підштовхують мінімум дві причини. По-перше, звужується гамма дозволених до застосування в птахівництві лікарських засобів. По-друге - витрати, які виникають в результаті захворювання птиці (навіть якщо поголів'я вилікувано), стають занадто великими.
Виходячи з цього, стратегія запобігання захворювань повинна базуватися на якості обслуговування ферм, генетичної стійкості птиці і на комплексі діагностичних і профілактичних заходів. Саме максимально рання діагностика інфекційних захворювань є гарантом зниження можливих економічних втрат.
У цій статті ми зупинимося на одному з найбільш перспективних методів діагностики - иммуноферментном аналізі (ІФА, ELISA).
Метод ІФА характеризується високою чутливістю, швидкістю отримання результатів, масовістю досліджень. Завдяки простоті, специфічності і високої чутливості метод ІФА дуже зручний для скринінгу великої кількості зразків, при цьому досліджуваної сироватки потрібно в мікродозах (1 мкл). Слід зазначити, що ІФА також є безпечним, так як використовуються інактивовані антигени. На відміну від інших методів діагностики ІФА дозволяє використовувати автоматичне обладнання: для обліку результатів - спектрофотометр і для проміжних стадій - промивач планшет (вошер). Це значно прискорює, автоматизує роботу лабораторії, знижує трудові витрати і вплив людського фактора на кінцевий результат.
Принцип методу заснований на здатності антитіл пов'язувати відповідні антигени, утворюючи комплекси «антиген-антитіло», які потім після обробки іншими реагентами набувають видиму оком забарвлення. Інтенсивність останньої (оптичну щільність) визначає прилад - спектрофотометр. Значення оптичної щільності прямо пропорційно кількості антитіл в сироватці крові, що потім перераховується в титр.
В даний час можливість постановки ІФА-методу у власній лабораторії має практично будь-яке підприємство середнього розміру. Обладнання не займає багато місця, не вимагає спеціального обслуговування і навичок роботи. Компоненти для проведення самої реакції поставляються в готових комерційно продаються наборах - тест-системах.
Протягом останніх років на ринку Росії з'явилося багато виробників ІФА-наборів. Серед них заслужене місце займають набори голландського виробництва «BioChek BV» - за їх незмінну якість, оптимальну ціну і, найголовніше, - переваги в роботі.
Використання імуноферментного аналізу від «BioChek» надає наступні можливості:
1. Створити обстоювання систему контролю (референтний контроль і референтна куряча сироватка), що дозволяє бути впевненим у правильності роботи компонентів набору, дотримання умов і методики реакції.
2. Скласти і проаналізувати епізоотичну ситуацію щодо особливо небезпечних вірусних хвороб птахівництва. Оцінити ступінь імунітету поголів'я і потенційних проблем зі здоров'ям і продуктивністю птиці.
3. Створити власну базу титрів птахофабрики в програмі «BioChek», що в подальшому дуже полегшує обробку та зберігання результатів. Слід розуміти, що інтерпретація отриманих результатів потребує досвіді, який напрацьовується шляхом збору та зберігання інформації і подальшого порівняння її з раніше отриманими результатами. Тільки тривалий, систематичний контроль стад дозволяє користувачам програми «BioChek» встановити свої власні стандарти для очікуваних (цільових) титрів, тобто створити базові дані для своїх стад. З цього випливає, Це необхідно тому, що базові дані є специфічними для кожної птахофабрики і можуть змінюватися в залежності від породи і віку птиці, типу вакцин і програм вакцинацій, а також інших можливих відмінностей в умовах утримання птиці.
4. За допомогою методичних вказівок «BioChek» розробити і застосувати схему серомоніторінга для ремонтних, батьківських та товарних стад.
5. Провести моніторинг вакцинації. При цьому ми оцінювали і оптимізували такі необхідні параметри програми вакцинації, як час проведення вакцинації (прогнозування дати вакцинації) відповідно до рівня материнських антитіл, вид програми (яка вакцина - жива чи інактивована, проміжна або гаряча, кількість вакцинацій), метод застосування вакцини.
При створенні власних базових даних по титрів і коефіцієнту мінливості (CV) це дає нам можливість провести оцінку ефективності програми вакцинації (рис. 1, 2).
Мал. 1. Імунограма моніторингу сироваток крові курчат бройлерів після вакцинації проти хвороби Ньюкасла на 12-й день, М ± m, n = 23
Вакцинація товарного бройлера на 12-й день привела до бажаного результату, тобто у даного стада вироблений достатній рівень захисту до ньюкаслської хвороби до кінця циклу вирощування.
Мал. 2. Імунограма моніторингу сироваток крові курчат бройлерів після вакцинації проти хвороби Ньюкасла на 21-й день, М ± m, n = 23
Вакцинація товарного бройлера на 21-й день привела до загрозливої ситуації, коли певний час дане стадо було не захищене, і в цей час можливе проникнення вірусу ньюкаслської хвороби до незахищеної сприйнятливою птиці.
Серологічний моніторинг є важливим інструментом в розробці і підтримці ефективних програм вакцинацій. Його метою є своєчасне забезпечення інформацією про імунний статус, покладаючись на яку, можна проводити ефективні заходи щодо зниження виробничих витрат і мінімізації збитків від хвороб.
Але все ж слід розуміти, що ІФА - це не панацея від усіх проблем птахівництва; для встановлення достовірного діагнозу необхідно серологічні дослідження проводити в комплексі з клінічними спостереженнями та іншими лабораторними дослідженнями. У птахівництві є багато різних методів застосування вакцин. При аерозольній одноразової вакцинації за допомогою ІФА неможливо зробити аналіз якості проведеної вакцинації, так як створюється місцевий імунітет. При застосуванні інших методів, коли створюється гуморальний імунітет, ми повинні оцінювати інтенсивність, однорідність і стійкість відповіді в титрах після введення вакцини.
Мал. 3. Гістограма моніторингу сироваток крові курчат бройлерів (при забої) після проведеної вакцинації проти хвороби Гамборо в 16-денному віці, М ± m, n = 23
Мал. 4: Гістограма моніторингу сироваток крові курчат бройлерів (при забої) після проведеної вакцинації проти хвороби Ньюкасла в 12-денному віці, М ± m, n = 23
Як бачимо, виявлення рівня антитіл має сенс при порівнянні з відомими стандартами і якщо вони оцінюються після закінчення певного часу після вакцинації. Якщо титри антитіл підвищуються після імунізації, то це свідчить про успішність проведеної вакцинації. Якщо титри в частині поголів'я високі, в той час як в іншій частині - нульові, то тестування показує, що стадо, можливо, інфіковано або погано проведена вакцинація.
6. Є ще одна дуже важлива здатність програмного забезпечення «BioChek»: це можливість провести профілювання племінних стад.
Моніторинг племінної птиці проводиться в встановлені моменти після первинної і вторинної вакцинації. Перша відповідь антитіл в сироватці крові птиці після контакту з інфекційним агентом або вакцинації можна виявити вже через 7-10 днів, і зазвичай вони досягають піку протягом 2-3 тижнів. Рівень антитіл зазвичай знижується через кілька днів після піку, оскільки патоген інактивується і виводиться. Вторинна імунна відповідь настає швидше після вторинного зараження або ревакцинації, ніж при первинному відповіді. Зазвичай рівень антитіл при вторинному відповіді знижується повільніше протягом більш тривалого часу. Правильно проведена первинна вакцинація дуже важлива для отримання високих і стійких титрів протягом 40-тижневого продуктивного циклу. Однак сам факт використання ефективних вакцин не є гарантом захисту поголів'я від вірусних хвороб. Важливу роль в профілактиці цих хвороб відіграє схема використання вакцинних препаратів. Комбіноване застосування живих та інактивованих вакцин дозволяє поєднати в собі всі їхні переваги і переслідує дві важливі мети - як захист курей від вірусних хвороб на протязі всього життєвого періоду, так і створення напруженої і тривалої імунітету у курчат, які були отримані від цих курей.
висновки:
1. Імуноферментний аналіз є доступним, зручним, специфічним і високочутливим експрес-методом оцінки імунітету поголів'я птахофабрики.
2. Використання тест-систем і програмного забезпечення «BioChek» дозволяє скласти об'єктивну епізоотичну ситуацію в кожному господарстві / стаді, зберігати і аналізувати всю наявну інформацію, а також спостерігати зміну титрів у часі.
3. Застосування серологічного моніторингу дуже важливо для складання ефективних програм вакцинації, контролю титрів в стаді і їх порівняння з цільовими титрами.
4. ІФА моніторинг - важливий інструмент для зниження виробничих витрат, раннього виявлення можливих захворювань.
Для більш детальної інформації звертайтесь до офіційного дистриб'ютора компанії «BioChek» в Росії: ТОВ «Сімба», м.Москва, тел. (495) 984-53-11.
