- Муропептидный профиль мутантов дикого типа и femAB, экспрессирующих жизнь.
- Муропептидный профиль мутантов дикого типа и femAB, экспрессирующих epr.
- ТАБЛИЦА 1
- ТАБЛИЦА 2
- Выводы.
Глицилглицин-эндопептидазы представляют собой стафилолитические ферменты, которые расщепляют пентаглициновые межпептидные мостики стафилококкового пептидогликана. Staphylococcus simulans biovar staphylolyticus, который продуцирует лизостафин, и Staphylococcus capitis , который продуцирует Ale-1, защищают себя от своих эндопептидаз с помощью соответствующего фактора иммунитета лизостафина Lif ( 1 , 10 ) или фактор устойчивости к эндопептидазе Epr соответственно ( 9 ). Резистентность обусловлена интеграцией серина вместо остатков глицина в пептидогликановом пентаглициновом междептидном мостике ( 1 , 9 , 10 ). Образование пентаглицинового межпептидного мостика у золотистого стафилококка зависит как минимум от трех факторов, FmhB ( 7 ), FemA ( 5 , 8 ) и FemB ( 4 ), которые необходимы для добавления первого, второго и третьего, а также четвертого и пятого глицинов соответственно. Lif и Epr демонстрируют до 41% идентичности с FemA и FemB, что позволяет предположить, что они могут катализировать включение серина, и Lif предлагалось дополнить FemB ( 11 ). Здесь мы определили положения остатков серина в межпептидном мостике у штамма дикого типа и различных мутантов femAB, дополненных lif или epr, и обнаружили высокую специфичность Lif и Epr для включения серина в положениях 3 и 5. Ни Lif, ни Epr один был способен удлинить укороченные поперечные мостики у мутантов femAB путем добавления остатков серина, что позволяет предположить, что оба белка зависят от FemA и FemB в отношении активности.
Муропептидный профиль мутантов дикого типа и femAB, экспрессирующих жизнь.
После экспрессии лифтов из плазмиды pCXlif ( 10 ), аминокислотная фракция пептидогликана в родительском штамме BB270 (NCTC 8325, mec ) и в соответствующем мутанте femB BB815 ( mec , Ω2006 femB :: Tn 551 ) ( 4 ) показал повышенное содержание серина, тогда как у мутанта femA UK17 (мутация mec , ocher в femA ) ( 3 ) и нуль-мутант femAB AS145 ( mec , ΔfemAB :: tetK ) ( 8 ) не был изменен ( 11 ). Полученные паттерны муропептидов BB270 / pCXlif и BB815 / pCXlif ( 11 ) показали дополнительные пики в мономерной и димерной фракциях (рис. а и б) по сравнению с профилями муропептидов родительских штаммов BB270 и BB815 (ранее UT43-2), определенных ранее ( 5 , 8 ). Основные мономерные пики двух штаммов собирали и обессоливали, как описано ( 7 ), и их аминокислотную последовательность анализировали с помощью автоматической деградации Эдмана ( 2 ). Поскольку основной мономерный пик M4 не мог быть отделен от нового пика S1 (BB270 / pCXlif) (рис. А), аминокислотная последовательность выделенных муропептидов выявила смесь нормального пептида с пятью остатками глицина (М4; ;90 %) и пептид Gly-Gly-Ser-Gly-Ser (S1; ~ 10%). Кроме того, могут быть обнаружены незначительные количества последовательности Gly-Gly-Ser-Gly-Gly. В соответствии с укороченным межпептидным мостиком у мутанта femB , основной мономерный пик M3, присутствующий в штамме BB815 / pCXlif (рис. B), содержал ∼40% Gly-Gly-Gly (M3) и ∼60% Gly-Gly-Ser (S2 ) последовательности. Времена удерживания муропептидов, содержащих три остатка глицина, и муропептидов, содержащих один серин и два остатка глицина, были почти идентичными в используемых условиях высокоэффективной жидкостной хроматографии. Поскольку пики, обозначенные S на фиг. A и b, отсутствовали в соответствующих изогенных родительских штаммах, вероятно, что эти муропептиды также были модифицированы серинсодержащими интерпептидными мостиками. Их аминокислотный состав не может быть определен из-за их низкой численности. В отличие от дикого типа и мутанта femB, описанного выше, экспрессия lif не изменила муропептидную структуру штаммов AS145 и UK17, и основные мономерные пики выявили только боковые цепи моноглицина, как описано ранее для мутантов femAB (данные не показаны) , С помощью аминокислотного анализа в этих двух штаммах не было обнаружено остатков серина.
Муропептидный профиль мономерной и димерной фракций S. aureus BB270 / pCXlif (a) и S. aureus BB815 / pCXlif (b), BB270 / pTSF6 (c) и BB815 / pTSF6 (d). Муропептиды получали, как описано ранее ( 8 ). Пики были идентифицированы путем сравнения с известным профилем родительских штаммов ( 4 , 8 ). Новые пики, не обнаруженные в изогенных родительских штаммах, заключены в квадрат. S - пики, которые не были проанализированы; S1-S6, пики, которые могут быть выделены и проанализированы по деградации Эдмана. M, P и Pn обозначают мономерный дисахарид, стволовый пентапептид и стволовый пентапептид, в которых Gln заменен на Glu, соответственно. М1, МП; M2, MP-Gly; M3, MP-Gly3; M4, MP-Gly5; M8, MPn-Gly3; М9, смесь Mpn-Gly5 и MP-Ala; и M10, MP- (Gly4Ala). Пептиды, отмеченные звездочками, вероятно, являются продуктами разложения, продуцируемыми эндопептидазами, и включают в себя следующее: M2 *, MT- (Gly2), всего два глицина, замещенных в двух возможных сайтах, либо Lys в положении 3, либо Ala в положении 4 стволового тетрапептида ; M4 *, MT- (Gly4); и M6 *, MT- (Gly6). Димерные муропептиды включают следующее: D3, димер М4 и D4, димер из М3 и М4 и D7, димер М3. D2 * является продуктом разложения, содержащим две единицы M4 *. Структура S-пептидов, содержащих остатки серина, описана в тексте.
Муропептидный профиль мутантов дикого типа и femAB, экспрессирующих epr.
Как и в случае с Lif, Epr увеличивает содержание серина в пептидогликане ( 9 ). При этом плазмида pTSF6, содержащая эпр под контролем собственного промотора ( 9 ) был введен в BB270, содержание серина увеличилось по сравнению со штаммом BB270, несущим контрольную плазмиду pGC2 (таблица). Аналогичным образом, количество серина увеличилось у экспрессирующего epr мутанта femB BB815 / pTSF6 . Однако в двойном мутанте femAB AS145, несущем pTSF6, можно было обнаружить лишь незначительное количество серина (таблица).
ТАБЛИЦА 1
Влияние эпр на состав клеточной стенки дикого типа и различных мутантов femAB
Штамм Молярное массовое отношение Ser Gly Ala Lys Ser + Gly BB270 / pTSF6 0,62 3,20 1,83 0,90 3,84 BB270 / pGC2 * 0,02 4,10 2,00 0,95 4,12 BB815 / pTSF6 0,39 1,90 1,57 0,86 2,29 BB815 / pGC2 0,14 2,20 1,57 0,82 2,34 AS145 0,96 0,66 0,06 0,66 2,02,06 0,96 0,62,06 0,96 0,62,06 0,96 0,62,06 0,96 0,62,06 0,96 0,66 0,06 0,96 0,66 0,06 0,66 0,66 0,96 0,66 0,62 0,96 0,66 0,66 0,96 0,66 0,66 0,96 0,66 0,06 0,66 0,66 0,06 0,66 0,66 0,06 0,66 0,66 0,06 0,06 0,06 0,06 2.06 AS250 0,94 1,05 AS145 / pGC2 * 0,02 0,95 1,98 0,93 0,97
Профили муропептида штамма BB270 / pTSF6 и мутанта femB, экспрессирующего epr BB815 / pTSF6, показали дополнительные пики (фиг. C и d) по сравнению с известными паттернами муропептида BB270 и BB815 ( 5 , 7 , 8 ). В дополнение к M4, второй основной пик (S1) с немного увеличенным временем удерживания был обнаружен в BB270 / pTSF6. Состав межпептидной боковой цепи пика S1 выявлен деградацией Эдмана следующими последовательностями: Gly-Gly-Ser-Gly-Gly (~ 55%) и Gly-Gly-Ser-Gly-Ser (~ 45%). Вместо одного основного пика контрольного штамма BB270 ( 8 ), димерная фракция штамма BB270 / pTSF6 содержала три основных пика (рис. в). Анализ аминокислотной последовательности межпептидных боковых цепей всех трех пиков выявил те же аминокислотные последовательности, что и в мономерном пике S1 с серином, включенным в положение три или в положения три и пять поперечного мостика (таблица). Перекрытие трех димерных пиков S3, S4 и S5 предотвращало выделение чистых пиков. Мы нашли два вида муропептидов в каждом из пиков, а именно Gly-Gly-Ser-Gly-Gly и Gly-Gly-Ser-Gly-Ser (таблица). Учитывая перекрестное загрязнение, различные относительные количества предполагают, что S3 содержит в качестве основных видов димеров Gly-Gly-Ser-Gly-Gly, тогда как S4 содержит как Gly-Gly-Ser-Gly-Gly, так и Gly-Gly-Ser-Gly- Ser и S5, хотя и загрязнены S4, в основном представляют димеры с мостиками Gly-Gly-Ser-Gly-Ser.
ТАБЛИЦА 2
Аминокислотный состав межпептидных боковых цепей основных димерных муропептидов S3, S4 и S5, обнаруженных в BB270 / pTSF6a
Пиковая / муропептидная последовательность Относительное количество (%) S3 Gly-Gly-Ser-Gly-Gly 78 Gly-Gly-Ser-Gly-Ser 22 S4 Gly-Gly-Ser-Gly-Gly 60 Gly-Gly-Ser-Gly-Ser 40 S5 Gly-Gly-Ser-Gly-Gly 50 Gly-Gly-Ser-Gly-Ser 50
Мономерный муропептидный паттерн мутанта femB BB815, дополненного epr, выявил один главный пик, содержащий 58% триглициновых перекрестных мостиков (M3), типичный для мутанта femB ( 4 ) и, аналогично BB815 / pCXlif, перекрестные мостики с последовательностью Gly-Gly-Ser (42%; S2). Два основных димерных пика (рис. D) состояли из поперечных мостиков триглицина (D7) и поперечных мостиков Gly-Gly-Ser (S6).
В соответствии с только немного увеличенным количеством серина, обнаруженным в пептидогликане, выделенном из мутантного штамма femA AS145 / pTSF6 (таблица) или UK17 / pTSF6 (данные не показаны), только один незначительный новый пик был обнаружен во фракции мономерного муропептида AS145. / pTSF6, который не может быть выделен в достаточных количествах для деградации Эдмана, но который, вероятно, будет замещен остатком серина (данные не показаны).
Выводы.
Мы могли бы показать, что экспрессия Lif или Epr в S. aureus приводила к включению сериновых остатков конкретно в положениях 3 и 5 боковой цепи интерпептида. Получающаяся в результате чередующаяся последовательность остатков глицина и серина защищает пептидогликан от эндопептидаз глицилглицина, которые не способны гидролизовать пептидные связи глицилсерина и серилглицина ( 6 ). Важно отметить, что детальный анализ муропептидов показал, что ни Lif, ни Epr не удлиняют межпептидный мостик. Это противоречит более раннему постулату, основанному исключительно на общем аминокислотном составе пептидогликана, который Lif дополняет FemB ( 11 ). Наблюдение того, что общая степень поперечной сшивки не изменялась у мутантных штаммов femAB по сравнению с их изогенными родительскими штаммами при экспрессии lif или epr (данные не показаны), также делает маловероятным, что увеличенное количество удлиненных межпептидных мостиков присутствовало в сильно сшитая фракция пептидогликана. Таким образом, кажется, что Lif требует функции FemA и / или FemB для включения серина в существующий межпептидный перекрестный мостик, и что эта функция не может быть катализирована только Lif или Epr. Это резко контрастирует с удлинением глицил-глицина боковой цепи FemA и FemB у S. aureus , несмотря на высокую идентичность последовательностей FemA и FemB с Lif и Epr. Тот факт, что включение серина зависело от присутствия либо FemA, и / или FemB, предполагает возможные белковые взаимодействия между FemA, FemB и Lif или Epr. По-видимому, между Lif и Epr существуют качественные различия, что предполагает более эффективное включение Ser Epr, чем Lif. Однако мы должны принять во внимание, что Epr был экспрессирован здесь из плазмиды с высоким числом копий и из ее собственного промотора, тогда как Lif находился под контролем индуцируемого ксилозой промотора в векторе с меньшим числом копий. По сравнению с FemA и FemB, функция Lif и Epr, по-видимому, отличается в отношении (i) серина вместо включения глицина, (ii) сайт-специфичности положений включенных остатков серина и (iii) неспособности присоедините дополнительные аминокислоты к пептидному перекрестному мосту самостоятельно.
Похожие
β-амилоид: ключевой пептид в патогенезе болезни Альцгеймера... иогенез A β Факторы, участвующие в патогенезе БА, были тщательно изучены, однако механизмы, управляющие этим заболеванием, до конца не изучены и остаются дискуссионными. Одним из преобладающих предложений является гипотеза амилоидного каскада, согласно которой Aβ является инициатором последующих событий, приводящих к AD ( рисунок ) ( Харди и Селькое, 2002 ): Пептиды Aβ самопроизвольно агрегируют и откладываются в растворимые олигомеры, Энергетический напиток Red Bull - действительно ли он работает?
«Red Bull» начал новую эру - энергетические напитки . Благодаря интенсивной рекламе она стала очень популярной, и на сегодняшний день существуют десятки ее аналогов. Позже на рынке также было множество напитков , но Red Bull был чем-то вроде классики. Поэтому ниже я буду иметь дело с некоторыми исследованиями его влияния и состава. Br J Clin Pharmacol. 2010 февраль; 69 (2): 136–142. Екатерина Корну 1INSERM, CIC 201, Лион, Граждан...
Br J Clin Pharmacol. 2010 февраль; 69 (2): 136–142. Екатерина Корну 1INSERM, CIC 201, Лион, Гражданские хосписы Лиона, Клиника Сервис Фармакологии, Лион, Университет Лиона, Лион и CNRS, UMR 5558, Лион Пьер Жозеф 2Hospices Civils de Lyon, Hôpital Louis Pradel, Служба реанимации, Брон, Университет Лиона I, Виллербанн, INSERM, ERI 22, Лион Сеголен Гайяр 1INSERM, CIC 201, Лион, Гражданские хосписы Лиона, Клиника Сервис Фармакологии, Инструкция по охране труда директора предприятия
Смотрите и скачайте себе Инструкцию по охране труда для директора и используйте ее в работе на вашем пидприемтсва Директор предприятия относится к категории «Руководители». В ст. 13 Закона Украины «Об охране труда» предусмотрено, что должностные лица, которых назначает работодатель, должны обеспечивать решение конкретных вопросов охраны труда. Требования о необходимости разрабатывать Путешествие с детьми. Стоит ли задумываться о вакцинации?
... типа малярии Не забывайте о некоторых инфекционных или паразитарных заболеваниях, для которых нет прививок. Несомненно, самой опасной болезнью является малярия , которая часто приводит к гибели людей, путешествующих в тропиках. По этой причине не рекомендуется ездить в малярийные районы с младенцами или детьми в возрасте до 5 лет . Однако в случае такого путешествия с детьми следует позаботиться о том, чтобы защитить ребенка от инфекции - предотвратить Репродуктивная система: TEAS
... ий женской и мужской репродуктивной системы Термины и терминология Procreate: дать жизнь новому человеку Гениталии: женские и мужские внешние органы размножения называются гениталиями. Влагалище: женское репродуктивное тело, которое соединяет внутренние и внешние женские репродуктивные органы и структуры и является входным путем для проникновения во время полового акта. Матка: внутренняя женская репродуктивная структура, которая находится чуть выше влагалища Психотерапевт Марина Билык
Ваш психолог, психотерапевт, лайф коуч. Консультирование, психотерапия, диагностика. Групповая терапия. Обучение медитации осознанность. Меня зовут Марина Билык, я практикующий психолог, когнитивно-поведенческий терапевт и психодрама-терапевт, ведущая тренингов, психотерапевтическими групп. Мой стаж в професии - 12 лет. Все мы ежедневно сталкиваемся с темы или иными проблемами, Которые зачастую не в состоянии решить самостоятельно. Обычно это происходит спустя, что у нас имеется объективного Витамин D, холестерин сульфат защищает от рака и многих заболеваний
Цензура и подавление витамина D не будут длиться долго. Хотя Медицинский институт (МОМ) и многие другие ведущие учреждения в онкологической отрасли (такие как Американское онкологическое общество, ACS) сознательно преуменьшают противораковое действие витамина D. Новое исследование, опубликованное в журнале Anticancer Research , выявило эту простую, но важную истину о витамине D, которую мы защищали годами: Среднестатистический взрослый человек должен ежедневно Фотодерматол Photoimmunol Photomed. Авторская рукопись; доступно в PMC 2010 27 марта. Опубликовано ...
Фотодерматол Photoimmunol Photomed. Авторская рукопись; доступно в PMC 2010 27 марта. Опубликовано в окончательной редакции в виде: PMCID: PMC2846322 NIHMSID: NIHMS187186 Пракаш Чандра 1Университетская программа по питанию и здоровью и медицинскому факультету, Атланта, Джорджия, США Линда Л. Вольфенден 1Университетская программа по питанию и здоровью и медицинскому факультету, Атланта, Джорджия, США
Комментарии
Так как же вы чистите свое тело, чтобы стимулировать жизнь, удалять омертвевшую кожу и придавать смысл чистке?Так как же вы чистите свое тело, чтобы стимулировать жизнь, удалять омертвевшую кожу и придавать смысл чистке? Я посвящаю чистке около 7-15 минут в день. Тем не менее, я начал чистить зубы в течение нескольких минут, чтобы привести кожу в соответствие с щетиной, давлением и довольно необычными движениями. И тогда я начал продлевать это время. Обычно я чищу тело утром, перед тем как войти в душ. Это работает лучше для меня, чем двойной эспрессо. Попробуйте это! Кожа Так почему бы не сделать жизнь немного приятнее?
Так почему бы не сделать жизнь немного приятнее? 😉 Ты ведешь "двойную жизнь"?
Ты ведешь "двойную жизнь"? Вас привлекает секс в неподходящих местах или ситуациях? Вам нравится смотреть захватывающие картины и сцены в газетах, журналах, фильмах и т. Д.? Влияют ли сексуальные фантазии на ваши интимные отношения или вы избегаете сексуальных проблем? Оставляете ли вы после полового акта своего партнера как можно скорее? Вы часто стыдитесь или чувствуете вину после секса? Вам стыдно за свое тело и свою сексуальность до такой Результатом были драматические буквы типа: «Мне четырнадцать, и я никогда не был в постели с девушкой, я гей?
Результатом были драматические буквы типа: «Мне четырнадцать, и я никогда не был в постели с девушкой, я гей?» В дополнение к сексуальной осведомленности, Браво и Попкорн были в значительной степени ответственны за процесс искажения нашего музыкального вкуса. Хорошо, может быть, Spice Girls и Backstreet Boys со временем защитились, но продвигали такие дерьмо, как Tic Tac Toe, Nana, Captain
Стоит ли задумываться о вакцинации?
Так как же вы чистите свое тело, чтобы стимулировать жизнь, удалять омертвевшую кожу и придавать смысл чистке?
Так почему бы не сделать жизнь немного приятнее?
Ты ведешь "двойную жизнь"?
Вас привлекает секс в неподходящих местах или ситуациях?
Влияют ли сексуальные фантазии на ваши интимные отношения или вы избегаете сексуальных проблем?
Оставляете ли вы после полового акта своего партнера как можно скорее?
Вы часто стыдитесь или чувствуете вину после секса?
Результатом были драматические буквы типа: «Мне четырнадцать, и я никогда не был в постели с девушкой, я гей?
